Генетикийн судалгаа хийх явцад бид РНХ-ийн дээж хангалтгүй, жишээлбэл, амны хөндийн жижиг анатомийн хавдар, тэр ч байтугай нэг эсийн дээж, хүний эсэд маш бага түвшинд транскрипцлэгдсэн тодорхой генийн мутацийн дээжийг судлахад ихэвчлэн тааралддаг.Мэдээжийн хэрэг, COVID-19-ийн шинжилгээнд зориулж арчдас зөв газартаа байхгүй эсвэл дээж авах үед хангалттай хугацаа байхгүй бол дээжийн хэмжээ маш бага байх болно, иймээс Эрүүл мэнд, гэр бүл төлөвлөлтийн хороо хоёр хоногийн өмнө гарсан. шинжилгээнд тэнцсэн бөгөөд хэрэв нуклейн хүчлийн дээж авагч зургаан дээж аваагүй бол та энэ тухай мэдээлж болно.
Бидэнд ийм асуудал тулгараад байгаа учраас урвалжийн мэдрэмж чухал, тиймээс RT-PCR-ийн мэдрэмжийг сайжруулахын тулд бид юу хийж чадах вэ?
Боломжит шийдлүүдийг хэлэлцэхээс өмнө бидний сая дурдсан нөхцөл байдлын хоёр том хүндрэлийг дурдъя.
Юуны өмнө бид дээжинд цөөн тооны эсийн популяци байгаа үед РНХ-ийн алдагдалд санаа зовдог.Хэрэв баганын арга, нуклейн хүчлийг тунадасжуулах гэх мэт уламжлалт салгах, цэвэрлэх аргыг хэрэглэвэл цөөн тооны дээж алдагдах магадлал өндөр байна.Нэг шийдэл нь тРНХ гэх мэт зөөвөрлөгч молекул нэмэх боловч бидний нөхөн сэргээх туршилт зүгээр гэсэн баталгаа байхгүй.
Тэгэхээр илүү сайн арга юу вэ?Өсгөвөрлөсөн эс эсвэл микроанатомийн дээжийн хувьд сайн сонголт бол шууд лизис ашиглах явдал юм.
Гол санаа нь эсийг 5 минутын турш хувааж, РНХ-ийг уусмалд гаргаж, дараа нь 2 минутын турш урвалыг зогсоож, дараа нь урвуу транскрипцийн урвалд лизатыг шууд нэмж, РНХ алдагдахгүй, эцэст нь үүссэн cDNA-г шууд хийнэ. бодит цагийн хариу үйлдэл рүү.
Гэхдээ хязгаарлагдмал эхлэлийн цэг эсвэл бага хэмжээний зорилтот генийн илэрхийллийн улмаас бид бүх РНХ-ийг дахин боловсруулж чадах ч бодит цагийн сайн дохио авах хангалттай загвар гаргаж чадахгүй бол яах вэ?
Энэ тохиолдолд олшруулахын өмнөх алхам нь маш ашигтай байж болно.
Дараах нь урвуу транскрипцийн дараа мэдрэмжийг нэмэгдүүлэх схем юм.Эхлэхээсээ өмнө бид аль зорилтыг сонирхож байгааг асууж, эдгээр зорилтод зориулж урьдчилан олшруулах тусгай праймеруудыг төлөвлөх хэрэгтэй.
Энэ нь 100 хүртэлх хос праймер, 10-14 удаа урвалын цикл бүхий холимог праймер үүсгэх замаар хүрч болно.Тиймээс олж авсан cDNA-г урьдчилан өсгөхийн тулд энэ шаардлагад тусгайлан зориулсан Мастер Микс хэрэгтэй.
Циклийн тоог 10-аас 14-ийн хооронд тогтоох болсон шалтгаан нь энэхүү хязгаарлагдмал тооны мөчлөг нь янз бүрийн зорилтуудын хооронд санамсаргүй байдлыг баталгаажуулдаг бөгөөд энэ нь тоон молекулын мэдээлэл хэрэгтэй судлаачдын хувьд маш чухал юм.
Урьдчилан олшруулсны дараа бид их хэмжээний cDNA авах боломжтой бөгөөд ингэснээр арын хэсгийн илрүүлэх мэдрэмж ихээхэн сайжирч, бид дээжийг шингэлж, санамсаргүй алдааг арилгахын тулд олон тооны бодит цагийн ПГУ-ын урвалыг хийж болно.
Шуудангийн цаг: 2023 оны 4-р сарын 11